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细胞复苏过程
日期:2024-08-25 20:30
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摘要:
细胞复苏是指将冻存在液氮里边或者-80℃冰箱中的细胞解冻,再培养传代。细胞复苏应采用快速融化的方法,这样的目的是为了让细胞外结晶在很短的时间内融化,从而避免慢悠悠的融化,使得水分渗入细胞内再结晶,从而对细胞再次造成伤害,从而影响细胞的存活率。
细胞复苏:
1:细胞是冻在-80℃的环境里面的,所以拿出来后,应该尽快去37℃水浴锅里解冻(我一般是放在PE手套里面,然后在37摄氏度的水域上快速融化。)这一步的操作不要超过一分钟!
2:用预热的培养基稀释冻存的细胞(这步我会把融化的冻存...
细胞复苏是指将冻存在液氮里边或者-80℃冰箱中的细胞解冻,再培养传代。细胞复苏应采用快速融化的方法,这样的目的是为了让细胞外结晶在很短的时间内融化,从而避免慢悠悠的融化,使得水分渗入细胞内再结晶,从而对细胞再次造成伤害,从而影响细胞的存活率。
细胞复苏:
1:细胞是冻在-80℃的环境里面的,所以拿出来后,应该尽快去37℃水浴锅里解冻(我一般是放在PE手套里面,然后在37摄氏度的水域上快速融化。)这一步的操作不要超过一分钟!
2:用预热的培养基稀释冻存的细胞(这步我会把融化的冻存液加入到15ml的管子里,加入3ml的预热的培养液,在超净台里完成)
3:离心200g 5-10min,具体的离心的时间不同的细胞略有不同得具体得看培养的protocol
4:在离心以后,倒掉上清(因为冻存液里用DMSO, 它的作用是在冻存细胞时加入,加入的量大概是总体积的10%,起到防冻剂的作用,防止冷冻过程中细胞内形成冰晶。)
5:用预热的培养液重悬细胞(根据培养的细胞皿的体积调整,我参照了GM12878,K562的培养protocol,刚开始的细胞密度不要超过10^6 /ML,但是细胞的密度也别太稀了,要不然长的会不好)
6:放到37℃,5%的二氧化碳培养箱中培养细胞。
PS:在看细胞冻存和复苏的时候,有一个词叫做“慢冻快融”,所以在解冻细胞的时候,在加入预热的培养基洗细胞之前,操作尽量的快,减少DMSO对细胞的伤害。我的冻存液的配方是:90%的FBS+10%的DMSO,冻存效果没问题!